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来源: 发布时间:2022-08-21

    所有反应孔背景信号好、Ct值都在19~25之间,荧光扩增曲线呈典型的S型,说明本发明实例1提供的血液样本快速提取法用于荧光PCR扩增的方法具有较好的可行性。将四份不同来源不同的人血液样本进行荧光PCR扩增检测,每份样本平行三次,结果分别如图2、图3、图4、图5所示,由图可见,每个样本的平行实验,其曲线的Ct值很接近且≤25。说明本发明实例提供的血液样本快速提取法用于荧光PCR扩增的方法有可靠的重复性以及较好的均一性。实施例2与市场现有的血液基因组提取试剂盒产品对比。本发明的具体步骤如下:将采血管颠倒混匀后,吸取100μL血液至,加入200μL的核酸释放剂(20mM~80mM的氢氧化钠溶液、~、~、~、~***钠、~3%甲酰胺),涡旋混匀,然后5000g离心30s,弃上清,获得细胞沉淀;然后再加入200μL核酸释放剂,涡旋1min至沉淀完全散开,5000g离心30s,弃上清;向细胞沉淀中加入50μL核酸释放剂,涡旋振荡1min,室温放置5min,12000g离心30s,取上清液即为提取的血液基因组DNA;取上清液3μL,加入到配制好的荧光PCR反应液,于ABI7500荧光PCR仪中进行扩增。选用某公司的血液基因组提取试剂盒作为方法比对,具体操作过程:将取血管颠倒混匀数次,吸取200μL血液于。口腔拭子取样前30分钟,不要吃东西,吸YAN,饮酒等。江西口腔口腔拭子批发

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    下面将结合实施例对本发明作进一步说明。实施例1一种可用于荧光PCR扩增的快速提取全血基因组的方法中的荧光PCR扩增反应液包括浓度或含量和组分如表1。将所述的荧光PCR扩增反应液对血液样本中的管家基因GAPDH进行荧光PCR扩增,方法如下:将采血管颠倒混匀后,吸取100μL血液至,加入200μL的核酸释放剂,涡旋混匀,然后5000g离心30s,弃上清,获得细胞沉淀;然后再加入200μL核酸释放剂,涡旋1min至沉淀完全散开,5000g离心30s,弃上清;向细胞沉淀中加入50μL核酸释放剂,涡旋振荡1min,室温放置5min,12000g离心30s,取上清液即为提取的血液基因组DNA;取上清液3μL,加入到配制好的荧光PCR反应液,于ABI7500荧光PCR仪中进行扩增。所述的荧光PCR扩增程序如下。步骤①:50℃,2min,循环1次。步骤②:95℃,5min,循环1次。步骤③:95℃15s,55℃30s(收集荧光),循环40次。结果分析:平行扩增的荧光定量PCR反应中,阴性对照无扩增,说明反应体系正常,无污染。用本发明处理了10份来源不同的人血液样本,然后用人管家基因GAPDH引物进行荧光PCR扩增检测,结果如图1所示。

    深圳市华晨阳科技有限公司暨BIORISEGROUP中国公司,位于深圳高新技术产业开发区,集研发,专业经营销售生命科学仪器设备和试剂耗材。公司秉承欧洲先进、严谨的生命科学技术和理念,结合中国生产和人力资源优势,打造性能价格比高的生命科学仪器设备,已广泛应用于:各级医院、大学及研究所、CDC、检验检疫局、动植物检疫、食品企业及乳品厂等。获得广大用户的一致好评。

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