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芯弃疾数字ELISA快速检测

来源: 发布时间:2025-05-08

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数字ELISA测量蛋白质浓度远低于传统ELISA的能力源于两种效应:1)SiMoA对酶标记的高度敏感性;以及2)通过数字化蛋白质检测可以实现的低背景信号。任何免疫测定的灵敏度由其灵敏度决定。检测技术到标签,抗体亲和力,试验背景,以及背景测量值的变异(%CV)27.SiMoA对酶非常敏感标签(图2)为在数字ELISA中检测亚飞摩尔浓度的标记蛋白提供了基础。也就是说,对于给定亲和力的抗体,其灵敏度为免疫测定将由测定背景决定,SiMoA的高标记灵敏度有助于降低这种背景。对照实验表明,数字ELISA的背景来自于检测抗体和酶的非特异性结合(NSB)与捕获珠表面结合(补充表2)。AsSiMoA相比传统检测方法具有更高的标记灵敏度,明显减少了检测抗体(~1nM)和酶标记物(1–50pM)的需要,以检测结合事件,与传统方法相比(标记试剂浓度~10nM)。降低的标记物浓度减少了NSB到捕获表面,从而导致背景信号明显降低。 超多重检测芯片节省耗材成本,21 项指标共享一套耗材,适合大规模筛查与研究。芯弃疾数字ELISA快速检测

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单分子酶检测到的比较低酶分子数假设蛋白质检测分析的更终灵敏度为背景信号可能由非特异性相互作用产生。为了评估内在敏感性,我们通过将400,000个带有生物素的珠子与不同浓度的酶缀合物链霉亲和素-阝-半乳糖苷酶(S阝G)混合,创建了具有明确酶与珠子比例的珠子群体。为了方便起见,生物素化珠子是通过将生物素化DNA与功能化的珠子杂交提供的。互补DNA。[我们注意到,该实验不应被视为敏感的DNA检测;该检测的敏感性受到非特异性相互作用的限制,如补充图2所示,这些相互作用发生在酶缀合物和表面结合的DNA之间。 芯弃疾数字ELISA快速检测芯弃疾JX-8B单分子ELISA检测产品,微量样本实现多重快速检测!

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微量样本超多重检测芯片:亚pg级灵敏度与高通量的协同创新,微量样本超多重检测芯片突破传统技术限制,单通道**多设计21个检测区,单个芯片并联8-16个**通道,检测速度达288-336测试/小时,性能媲美化学发光技术,灵敏度达亚pg级别。其“省样本、省耗材、省空间”优势***:5μl微量进样适配稀缺样本,21项指标共享一套耗材降低成本,桌面式扫描仪节省实验室空间。在**普查中,该芯片可同时筛查29种肺*标记物,筛选特异性>80%的组合(如CEA、SA、CA242),提高早期诊断准确性;在炎症因子检测中,对IL-1β、IL-6等低丰度细胞因子的检测线性范围宽泛,为疾病早期***筛查提供了高效解决方案,尤其适合大规模流行病学调查与个体化医疗中的多因子分析。

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我们已经开发了两种临床相关蛋白的检测方法——前列腺特异性抗原(PSA)和肿瘤坏死因子α(TNF-α),以确定高酶标记物单体提供的灵敏度转化为高灵敏度的检测方法血液中的蛋白质。两种蛋白质的数字ELISA如图1所示??⒄庑┦匝榈墓丶问牵褐樽优ǘ群土街直昙鞘约粒觳馐约梁兔概剂铮┑呐ǘ?。珠子浓度的选择取决于几个相互竞争的因素。首先,足够的珠子必须在场以从热力学和动力学中捕获大部分目标分析物从热力学角度看,100μL中有20万个珠子,每个珠子大约有8万个与之结合的抗体25相当于约0.3nM的抗体浓度,在该浓度下,抗体-蛋白平衡导致高捕获效率(>70%)(D.M.R.,E.P.F.,D.C.D.,未发表工作)。 POCT 芯片推动急诊检测向多指标联检升级,15 分钟内出具心肌损伤等多项结果。

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抗体筛选芯片的正交验证能力,抗体筛选芯片支持同一反应体系下不同样本的交叉反应测试,为抗体的正交验证提供了高效平台。在筛选IL-6抗体对时,可同时测试8种捕获抗体与8种标记抗体的组合,通过阴性质控品与阳性质控品的比值分析,快速排除非特异性配对,筛选出亲和力常数(KD)<10??M的高特异性抗体。该能力在复杂样本(如含有异嗜性抗体的血清)检测中尤为重要,可提前识别潜在干扰因素,提升诊断试剂盒的临床适用性。此外,芯片的低密度阵列设计(如3×7排列)便于后续单克隆抗体的克隆化筛选,形成从初步筛选到精细优化的完整技术链条,加速抗体药物与诊断试剂的研发周期。芯弃疾JX-8B数字ELISA,微量检测,使用微量样本就能测试;高科技数字ELISA使用灵活

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从TNF-α数字ELISA测定的检测限为~150aM(2.5fg/mL),相当于全血中的~600aM(10fg/mL);市场上可用的ELISA对TNF-α的比较高灵敏度在血清中的LOD为21fM(0.34pg/mL)(补充图3)。两种方法的目标蛋白零浓度尖峰均为为这些实验提供有用的阴性对照:25%的血清含有多种蛋白质的微摩尔浓度,在这些高蛋白质背景之上可以检测到非常低浓度的目标蛋白。我们还开发了一个证明用于显示低浓度核酸可以检测到的DNA的主要数字分析方法,而无需复制目标


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