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皮克级数字ELISA高速检测

来源: 发布时间:2024-12-26

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每个生物实验室都用得起的单分子免疫检测

我们已经开发了两种临床相关蛋白的检测方法——前列腺特异性抗原(PSA)和肿瘤坏死因子α(TNF-α),以确定高酶标记物单体提供的灵敏度转化为高灵敏度的检测方法血液中的蛋白质。两种蛋白质的数字ELISA如图1所示??⒄庑┦匝榈墓丶问牵褐樽优ǘ群土街直昙鞘约粒觳馐约梁兔概剂铮┑呐ǘ?。珠子浓度的选择取决于几个相互竞争的因素。首先,足够的珠子必须在场以从热力学和动力学中捕获大部分目标分析物从热力学角度看,100μL中有20万个珠子,每个珠子大约有8万个与之结合的抗体25相当于约0.3nM的抗体浓度,在该浓度下,抗体-蛋白平衡导致高捕获效率(>70%)(D.M.R.,E.P.F.,D.C.D.,未发表工作)。 芯弃疾JX-8B数字ELISA,超敏检测,理论可达飞克级;皮克级数字ELISA高速检测

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光纤束购自SchottNorthAmericaouthbri,非增强型光泽硅片购自SpecialtyManufacturing(Saginaw,NatBiotechnol.作者手稿;可在PMC2010年12月1日获得。Rissin等人,第7页盐酸、无水乙醇和分子生物学级别的吐温-20均购自西格玛-奥德里奇(圣路易斯,密苏里州)。2.7-μm-二羧基磁珠购自瓦里安公司(加利福尼亚州莱克福斯特)。单克隆抗人TNF-α捕获抗体、多克隆抗人TNF-α检测试剂和重组人TNF-α均购自R&DSystems(Minneapolis,MN)。单克隆抗PSA捕获抗体、单克隆抗PSA检测试剂和纯化的PSA购自BiosPacific(埃默里维尔,加利福尼亚州);使用标准方法将检测试剂抗体生物素化。1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)、N-羟基磺基琥珀酰亚胺(NHS)和SuperBlock®T-20封闭缓冲液购自ThermoScientific(Rockford,IL)。纯化DNA购自综合DNA技术公司(Coralville,IA)。 医学实验室数字ELISA微量样本芯弃疾JX-8B数字ELISA,低成本单分子检测;

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为了证明检测极低浓度的可能诊断价值使用数字ELISA检测血液中的蛋白质,对接受治理性前列腺切除术(RP)的患者血清样本中的PSA进行了测量。PSA是前列腺病的血清生物标志物病症既用作筛查工具,也用于监测住院患者的复发接受治理性前列腺切除术28。治理性前列腺切除术后,绝大多数PSA被消除,水平低于标准商用检测方法的检测限(3pM或0.1ng/mL)。定期监测这些患者的PSA恢复情况可以检测前列腺病的复发,但术后几年内生化复发可能不会被发现。

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将200,000个功能化DNA捕获探针与100μL孵育含有目标DNA的溶液(5‘-TTGACGGCGAAGACCTGGATGTATTGCTCCTCTGAACGGTAGCATCTTGACAAC-3‘孵育2小时后,移除DNA靶标溶液,用0.2×SSC缓冲液洗涤珠子三次含有0.1%Tween-20的微球重新悬浮并与10nM混合生物素标记的信号探针(5‘-TACATCCAGGTCTTCGCCGTCAA/生物素/-3’)对目标DNA具有特异性,孵育1小时。然后将珠子在去除信号探针后用含0.1%吐温-20的0.2×SSC缓冲液洗涤三次。随后向珠子沉淀中加入10pMS阝G溶液,混匀并混合1小时。然后将珠子分离并在含0.1%吐温-20的5×PBS缓冲液中洗涤六次。重悬于10μLofPBS中并加载到飞升微升孔阵列上。 芯弃疾JX-8B数字ELISA,微量多重检测,微量样本就能同时测试4项指标;

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单分子POCT产品,帮您数字化高灵敏检测,且微量样本多重指标检测;

低成本便捷检测:数字ELISA芯片,分为手动版和自动版,其中手动版可以直接使用移液枪加液检测;更少可以使用单片4孔芯片(同时做4个test)、8孔芯片(同时做8个test)进行检测;(活动期8孔芯片只需要200元即可测试实验);芯片内只需要微量样本(10-20ul)即可完成检测,所需要的试剂量也明显降低,且每个芯片孔内可同时检测2-4个检测指标,分摊下来检测成本有效降低;其中自动版可搭配小型多通道加样仪,也可以进行高通量的ELISA芯片同时检测。1)检测快速:数字ELISA芯片高敏检测试剂盒,搭配预埋的磁珠和荧光量子点试剂,整体反应在芯片的微小流道内进行,反应速度快、清洗速度快;更短只需要15-20min,就可以进行完整的检测流程,接近POCT检测产品,可以有效节省您的实验时间。2)高灵敏检测数字ELISA高灵敏度检测芯片,使用单分子免疫检测的原理(原理同simoa等产品,使用反应微球单分散阵列排布的原理,将反应信号进行单分子单分散检测),在快速、便捷检测的同时,仍能保持高灵敏度,常规指标轻松达到0.2-1pg/ml的灵敏度 7)数字化高敏ELISA芯片,低成本、便捷、快速进行微量样本的检测;皮克级数字ELISA高速检测

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由于活性珠子的百分比接近50%(酶与微球的比例大于~1:1.5),然而,使用图像分析软件区分“开启”和“关闭”孔变得具有挑战性,我们达到了数字动态范围的实际上限。例如,图2中7fM(~45%活性)的信号偏离了线性。因此,这里使用50,000个孔展示的数字线性动态范围是从3.5fM到350zM,即大约四个对数单位。前提是蛋白质使用适当的酶浓度进行标记,这种动态范围对于许多临床应用来说是足够的 皮克级数字ELISA高速检测

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