子宫内膜异位症模型造模方法选用非动情期大鼠,术前1 d予戊酸雌二醇0.2 mg/只灌服。手术在室温28~32℃环境下进行,无菌操作。以10%水合氯醛3 mL/kg进行腹腔注射麻醉,将麻醉后的大鼠仰卧位固定于手术板上,腹部备皮,常规消毒铺巾。大鼠下腹正中耻骨联合上1 cm处以上取长约2~3 cm纵行切口,进腹后在膀胱背侧找到“Y”字型子宫,游离右侧子宫,近端离子宫角1 cm处结扎,远端离卵巢1 cm处结扎,剪下右侧子宫。将剪下的子宫组织放入盛有无菌生理盐水的培养皿中,纵向剖开。将子宫内膜与肌层分离,剪取3块3 mm×5 mm的内膜组织,用4-0号可吸收线将内膜面贴于种植部位,分别缝合在左侧卵巢、宫骶韧带以及左侧远离腹部切口的腹壁上。随后用庆大霉素稀释液冲洗腹腔,***用0号丝线分层缝合腹部切口,常规关腹。术后密切观察大鼠呼吸、心率,待其自然苏醒,正常喂养,观察大鼠伤口及生活情况。术后第1天开始每只大鼠肌内注射庆大霉素0.1 mL,每天1次,连续7 d。术后第10天开始每天予戊酸雌二醇0.02 mg/kg灌服,连续5 d。子宫内膜异位症模型的构建需要精确的实验条件和操作技术。湖北真实的子宫内膜异位症模型怎么造模
自体移植的子宫内膜异位症模型可用子宫组织块移植法和子宫内膜移植法:前者将动物子宫剪开后直接进行移植,后者将子宫内膜层与肌层分离后,种植内膜层。非人灵长类动物还可将子宫体向腹腔内翻转,使经血逆流入腹腔形成病灶。目前大部分实验选择动物的动情期(采集阴道分泌物来确定)进行,认为此时形成模型成功率高。但有研究表明,在动物非动情期进行手术,术后补充一定量雌性因子,与动情期形成子宫内膜异位症模型率差异元明显性意义。浙江靠谱的子宫内膜异位症模型怎么造模该模型有助于我们评估不同改善方法对子宫内膜异位症患者的生活质量改善程度。
子宫内膜异位症模型的观察指标验证模型是否成功:大鼠建模28d后再次手术,腹腔麻醉后固定,腹部备皮,消毒铺巾,取原切口旁开腹,取出3个不同部位的移植物。记录移植物大体特点。用游标卡尺测量移植物的长度、高度与宽度,按公式计算体积:体积=0.52×长×宽×高[4]。用电子天平称取移植物质量。将取出的移植物和左侧子宫的在位内膜标本用10%多聚甲醛固定,常规石蜡包埋,H-E染色,显微镜下观察组织病理学变化来验证模型的成功率。
与正常子宫内膜细胞相比,子宫异位内膜异位症模型细胞的自噬相关基因(MAP1LC3B,也叫LC3B和BECN1,也叫Beclin1)表达水平明显下降。通过将FCGR3- NK细胞分别与抑制自噬(3-MA-ESC和siATG5-ESC)、促进自噬(Rap-ESC)和未处理(Ctrl-ESC)的异位内膜细胞共培养,来模拟体内微环境,结果发现与未处理的ESCs共培养后FCGR3- NK细胞比例上升、而且KIR2DL1和KIR3DL1表达上调、NCR3, NCR2, IFNG, PRF1和GZMB表达下调;而与抑制了自噬的ESCs共培养的NK细胞这种变化更加强烈,与促进自噬的ESCs共培养则会减弱这些变化(Fig2)。该模型为我们揭示了子宫内膜异位症中细胞信号传导的异常变化。
子宫内膜异位症自然发生的前提是有月经周期,非人灵长类动物可用于自发性模型的建立,其与人类疾病的发生位点相同,且形态学与人类相应部位的相同,以前人们认为自发模型很少在卵巢形成EM,因此与人类EM的发生可能存在差异,但Dick[町等的研究改变了这一理论,证实卵巢也易发病。而诱发性模型(除非人灵长类动物)不能完全模拟人类发生EM的过程、环境。因此,非人灵长类动物是比较好的模型,但其发病率低,约25%-35'3毛;周期在10年以上;且来源、少,所需经费昂贵。而诱发性模型成功率为759串-959岛,实验周期为2个月左右,来源普遍,价格较低,适合大样本研究。该模型为我们提供了一个研究子宫内膜异位症中神经-内分泌-免疫网络失衡的平台。小鼠子宫内膜异位症模型动物实验外包
研究人员正在利用子宫内膜异位症模型探索新的改善手段。湖北真实的子宫内膜异位症模型怎么造模
手术引起的子宫内膜异位症的自体啮齿动物模型的目标是模仿在女性的疾病。我们和其他人曾在小鼠或大鼠镜观察到,在妇女疾病5,6子宫内膜异位病灶观察表明,改变基因的表达模式。鼠标在执行手术的优点之一是,大量的转基因小鼠品系可以帮助研究人员确定的具体组成部分子宫内膜异位症的建立和发展中的重要作用。另一种模式,即切除子宫内膜碎片是免疫功能低下小鼠的腹膜也被普遍使用,但受限于缺乏正常的免疫系统被认为是在子宫内膜异位症2,7的重要。重要的是,手术引起的子宫内膜异位症的小鼠模型是一个通用的模型已被用于研究免疫系统8,9,10和 11,12因子环境因素如何影响子宫内膜异位症,以及子宫内膜异位症的影响,对fertility 13和痛苦14。湖北真实的子宫内膜异位症模型怎么造模