好坏有着密切的联系。由于各种抗原的生化、物理性质不同,如温度高低、酸碱度强弱及各种化学试剂的作用均可影响抗原的免疫学活性,良好的细胞和组织学结构将有助于抗原的准确定位。因此,细胞和组织标本的采集制备在免疫组织化学技术中占有十分重要的位置。(一)细胞标本的取材目前,免疫组化技术已经应用于细胞学诊断,如鉴别低分化*与恶性淋巴瘤、黑色素瘤、低分化肉瘤等。CEA应用于胸腹水中间皮瘤与*的鉴别,热修复法 现常用微波修复、高温高压修复、水浴加热修复法。较常用的修复法是pH6.0枸橼酸缓冲液。修复过程中的注意要点是:(1)达到规定的温度(92℃~95℃以上);(2)维持一定的时间,微波修复、水浴加热须控制在10~15min,高温高压修复须控制在2min左右;(3)避免切片干涸,如果切片干涸,抗原则可能完全丢失;(4)加热后必须经过室温自然冷却20~30min,使未折叠的蛋白分子链恢复天然构型。免疫组化服务性价比高周期短。黑龙江特殊染色免疫组化检测电话
免疫胶体金技术
免疫胶体金技术是以胶体金这样一种特殊的金属颗粒作为标记物。胶体金是指金的水溶胶,它能迅速而稳定地吸附蛋白,对蛋白的生物学活性则没有明显的影响。因此,用胶体金标记一抗、二抗或其他能特异性结合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作为探针,就能对组织或细胞内的抗原进行定性、定位,甚至定量研究。由于胶体金有不同大小的颗粒,且胶体金的电子密度高,所以免疫胶体金技术特别适合于免疫电镜的单标记或多标记定位研究。由于胶体金本身呈淡至深红色,因此也适合进行光镜观察。如应用银加强的免疫金银法则更便于光镜观察。
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被检测的物质
组织或细胞中凡是能作为抗原或半抗原,如蛋白质、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受体、酶、核酸及病原体等都可用相应的特异性抗体进行检测。
6、特点
1)特异性强
免疫学的基本原理决定抗原与抗体之间的结合具有高度特异性,因此,免疫组化从理论上讲也是组织细胞中抗原的特定显示,如角蛋白(keratin)显示上皮成分,LCA显示淋巴细胞成分。只有当组织细胞中存在交叉抗原时,才会出现交叉反应。
2)敏感性高
在应用免疫组化的起始阶段,由于技术上的限制,只有直接法、间接法等敏感性不高的技术,那时的抗体只能稀释几倍、几十倍;现在由于ABC法或SP三步法的出现,使抗体稀释上千倍、上万倍甚至上亿倍仍可在组织细胞中与抗原结合,这样高敏感性的抗体抗原反应,使免疫组化方法越来越方便地应用于常规病理诊断工作。
定位准确、形态与功能相结合
该技术通过抗原抗体反应及呈色反应,可在组织和细胞中进行抗原的准确定位,因而可同时对不同抗原在同一组织或细胞中进行定位观察,这样就可以进行形态与功能相结合的研究,对病理学领域开展深入研究是十分有意义的。
7、从蛋白水平检测角度,免疫组化技术与Western blotting、ELISA的异同
1)Western blotting
蛋白质免疫印迹,也是利用抗体抗原反应原理,结合化学发光等技术来检查组织或细胞样品内蛋白含量的检测方法。与免疫组化技术相比,定量可能更加准确;当然Western blotting也可定性和定位(通过提取膜蛋白或核酸白、胞浆蛋白分别检测其中抗原含量,进而间接反映它们的定位),但敏感性远远低于免疫组化技术。
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染色免疫组化可以辅助病理诊断、指导、评估预后,所以在做免疫组化过程中的质控问题处理尤其重要[1]。随着免疫组化试剂新种类不断出现及方法的改进,特别是即用型试剂盒的出现,使抗体的标记更加简便、快捷,更加规范化。免疫组化标准化染色技术是一项实验性很强的技术,任何一个环节出现问题,都可以直接影响免疫组化结果,
【摘要】目的研究CEA免疫组化染色在检测系膜微转移及环周切缘(CRM)侵犯方面的价值。方法选取经纤维结肠镜及病理证实为直肠*病人40例,应用大组织切片技术对术后标本处理,分别行常规染色及CEA免疫组化染色,比较分析两种染色方法在检测系膜微转移及CRM侵犯方面的价值。结果CEA染色检测**浸润程度大于常规病理染色,差异有性(t=5.2**<0.001)
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常用染色方法
根据标记物的不同分为免疫荧光法,免疫酶标法,亲和组织化学法,后者是以一种物质对某种组织成分具有高度亲合力为基础的检测方法。这种方法敏感性更高,有利于微量抗原(抗体)在细胞或亚细胞水平的定位,其中生物素—抗生物素染色法较好常用。判定分析编辑
免疫组化染色(IHC)
免疫组化染色(IHC)
从实验结果而言,免疫组化技术服务主要涉及抗体实验结果的描述与分析,图片的确定与选取,相关数据的提供,上述工作是免疫组化工作的重点内容,只有严格的实验设计,标准的实验操作,专业化的结果分析才能更好的满足客户的要求,这点对于形式为腹水,上清,培养液之类的抗体显得更为重要。关于上述服务内容应该在实验开始前由双方明确,一般而言,客户方实验前应提出需要什么样的结果与分析,例如是简要还是详细的描述实验结果,需要实验数据否,图片的数量与规格等。如果为双盲试验或有第三方参与,则事先申明。
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