PCR- RFLP 法是先扩增一基因或基因片段, 再用限制性内切酶酶切扩增片段, 然后电泳分酶 切片段。PCR- RFL P 分析细菌的 16S rRNA 基 因, 可鉴定到种和亚种的水平。16S rRNA 基因的 扩增产物如用一种限制性内切酶消化得到的图谱 信息很少, 分辨率不高。因此, 对于某些菌种需要 两种或三种不同的内切酶方能作后续的鉴定。如 将该技术与 ARDRA( Amplified rDNA Restriction Analysis) 技术结合, 依据原核生物 rDNA 的保守 性, 将扩增的 rDNA 进行酶切, 然后通过酶切图谱 来分析菌间的多样性, 该法无需将试样分纯, 简 便、高效, 是一种很有发展前途的方法。上海融享生物科技有限公司主营测序很多，其中ITS 销很好。重庆真核微生物16S测序机构电话

在细菌的系统分类学研究中有用的和常 用的分子钟是 rRNA, 其种类少、含量大(约占细菌 RNA 含量的 80%), 分子大小适中, 存在于所有的 生物中, 特别是其进化具有良好的时钟性质, 在结 构与功能上具有高度的保守性, 素有“细菌化石” 之称。rRNA 是细菌和真核细胞核糖体的基本组 成部分, 编码 rRNA 的基因是按 5′- 16S- 23S- 5S- 3′方式排列的, 由两个非编码的间隔区序列所分 开。16S rDNA、23S rDNA、5S rDNA 三部分组成 一个 RNA 操纵子, 这个操纵子作为一个单位进 行转录。转录后处理成为成熟的 16S、23S 和 5S rRNA。重庆真核微生物16S测序机构电话上海融享生物科技有限公司测序的16s 拥有完善的售后服务。

１６Ｓ～２３ＳｒＲＮＡ 基因间区不但可以用于菌种间的鉴别，还 可

以用来分辨１６ＳｒＲＮＡ 基因不能鉴别的非常接近的菌种和种

内 菌 株，是 １６ＳｒＲＮＡ 基因分析很好的补充。金 中 淦

等利用１６ＳｒＲＮＡ、１６Ｓ～２３ＳｒＲＮＡ 基因对主要血流

病原菌进行检测比较后认为在细菌鉴定中，１６Ｓ～２３ＳｒＲＮＡ

可作为比１６ＳｒＲＮＡ 基因更好的分子靶标，可 以 在２４ｈ内 将

病原菌的种类报告给临床医生。Ｚｈｕ等的 研 究 表 明１６Ｓ～

２３ＳｒＲＮＡ 基因分析 可 以 将１６ＳｒＲＮＡ 序 列 同 源 性 达９７％的

两株黏质沙雷菌区分开。根据１６Ｓ～２３ＳｒＲＮＡ 基因间区两端

被高 度 保 守 的ｒＲＮＡ 所包围的结构特点，可 利 用 其 两 端 １６Ｓ

ｒＲＮＡ 及２３ＳｒＲＮＡ 保守区设计通用引物作上、下 游 引 物，特

异性扩增特定细菌 的１６Ｓ～２３ＳｒＲＮＡ 基 因 间 隔 区，根 据 片 段

数目、长度、序列的多态性或测序来鉴别微生物。

原核生物(细菌、古菌) rRNA 按核酸的沉降系

数分为 3 种，分别为 5S、16S 和 23S。16S rRNA 是

核糖体 RNA 的一个亚基，16S rRNA 基因就是编码

该亚基的基因。其存在于所有细菌染色体基因组

中，参与生物蛋白质的合成过程，并在生物进化的

漫长历程中保持一定的遗传保守性，是细菌系统分

类研究中有用和常用的分子标记。16S rRNA

基因分子大小适中(长度约为 1540 bp)，在结构与功

能上又具有高度的保守性，检测方便并且与原核生

物的系统发育关联密切，因此逐渐成为常用的原

核生物标记基因。16S rRNA 编码基因序列共有

9 个保守区和 9 个高可变区，其中 V4?V6 区

数据库信息全、特异性好，是细菌多样性分析的常

用目标区域。

上海融享生物科技有限公司测序的ITS 拥有完善的售后服务。

用下一代测序技术(next generation sequencing，NGS)测定

16S/18S/ITS 某个可变区的序列，可以反映环境样

品在细菌、、古菌等组成的微生物群落之间的

差异，对研究海洋、土壤、宿主等不同环境中的

微生物群落组成及动态变化有重要的指导作用，同

时也是系统发育和分类学研究中一种使用的方法。

显，能够反映出种属间甚至菌株间的差异。此外，

ITS 序列片段较小(ITS1 和 ITS2 长度分别为 350 bp

和 400 bp 左右，但不同物种之间存在一定差异)，

易于分析。也就是说，ITS 具有更高的扩增和测序

成功率以及分类学分辨率，目前已被应用于真

菌不同种属的系统发育分析。 您喜欢16s 的这些特点吗？重庆真核微生物16S测序机构电话

18S 的各种测序应用领域还是不一样的。重庆真核微生物16S测序机构电话

2000 年, M Manzano 等利用温度梯度凝胶电泳的方法 分析 16S rRNA 对分离自食物中的利斯特氏菌进行了鉴定。 2001 年, HJ Monstein 等利用温度梯度凝胶 电泳和 PCR 扩增 16S rRNA 的 V6 区 ( 可变区) 片段的方法对 16 株肠球菌进行了鉴定。2001 年, 沈永才等利用 16S rRNA 的 PCR 法鉴定了 8 株 双歧杆菌, 并用 16S rRNA 荧光定量 PCR 法对双 歧杆菌进行了定量检测。2002 年, A Manero 等对 利用 16S rRNA 探针杂交的方法鉴定肠球菌属细 菌进行综述。2002 年, Y Woo- PatrickC 等通过 16S rRNA 序列分析的方法, 从一位菌血症胆囊 炎患者体内检测到了唾液乳杆菌的存在。2003 年, Y Seto 等对 16S rRNA 序列特定长度片段进 行 分 析 , 对 人 体 粪 便 样 品 中 嗜 酸 乳 杆 菌 ( Lactobacillus acidophilus) 的分布情况进行了检 测。2003 年, JR Byun 等利用分析 16S rRNA 和 23S rRNA 间区序列的方法对一株鼠李糖乳杆菌 ( Lactobacillus rhamnosus ATCC 53103) 进行了鉴 定, 并与干酪乳杆菌( L. casei) 、嗜酸乳杆菌( L. acidophilus) 和瑞氏乳杆菌( L. helveticus) 的 16S rRNA 和 23S rRNA 间区片段进行了比较。重庆真核微生物16S测序机构电话