标准曲线的各
项指标：斜率、扩增效率（E）、相关系数（R2
）、间距均需进行
严格评价，从而确保该曲线的可用性。各点间距应相等，间
距以及斜率的Absolute 值应满足 3.100~3.582，相关系数 R2＞0.99，
扩增效率（E）在 90%~110%之间。扩增效率、斜率以及间距
三者相互关联，扩增效率（E）=10（-1/斜 率 ）
-1，斜率的Absolute值恰
是各点之间的平均间距。当扩增效率＜90%时，间距以及 斜
率的Absolute 值会＞3.582；当扩增效率＞110%时，间距以及斜率
的Absolute 值会＜3.10，故扩增效率越低，斜率的Absolute 值越大，间
距越宽；扩增效率越高，斜率的Absolute 值越小，间距越窄。扩增
效率过低，酶的活性可能出现了问题，或反应体系不适合反
应的有效进行。若扩增效率过高，反应管内可能存在目的基
因扩增之外的其他非特异扩增，需要对引物进行一个溶解
曲线的检测，优化反应体系以及反应程序。 上海融享生物科技有限公司项目qPCR价格优惠。上海SYBRGreen法qPCR哪里有
实时荧光定量 PCR(real-time quantitative
polymerase chain reaction，real-time Q-PCR)技术于
1996 年由美国 Applied Biosystems 公司推出，由于该
技术不仅实现了 PCR 从定性到定量的飞跃，而且与常
规 PCR 相比，它具有特异性更强、灵敏度高、重复性
好、定量准确、自动化程度高、全封闭反应等优点成为
分子生物学研究中的重要工具，目前已得到多应用[1]。
实时荧光定量 PCR 的应用范围非常多，包括 mRNA
表达的研究、DNA 拷贝数的检测、单核苷酸多态性的测
定等[2]。它能对结核分枝杆菌、乙型、丙型肝炎、爱滋
病、淋球菌、沙眼衣原体等病原体进行准确的定量
检测。其定量范围极宽，无需做梯度稀释，特异性更强，
克服了假阳性。 上海SYBRGreen法qPCR哪里有一个好的qPCR项目需要具备哪些特点您了解吗？
每个模板的 Ct 值与该模板的起始拷贝数的对数存 在线性关系 ,起始拷贝数越多 , Ct 值越小。利用已 知起始拷贝数的标准样品可作出标准曲线 ,因此 ,只 要获得未知样品的 C t 值,即可从标准曲线上计算出 该样品的起始拷贝数。SYBR GreenI 是一种能 结合到 dsDNA 小沟部位的具有绿色激发波长的染 料,它只有与 dsDNA 结合后才会发出荧光 。在变 性时 ,DNA 双链分开 , 不产生荧光;在复性和延伸 时,形成 dsDNA , SYBR GreenI 发出荧光(宋敏等 , 2005 ;张晶等, 2005)。因此,荧光强度可以**扩增 产物的数量。
该探针是长度为 20 ～ 24 bp 的寡核苷酸，在其 5' 末端标记 1 个荧光报告基团，3'末端标记 1 个荧光淬 灭基团，其序列与 2 个引物包含序列内的 1 段 DNA 模板完全互补。该方法是当探针保持完整时利用 Taq 酶( 5'→3'外切酶) 的活性淬灭基团吸收发射的 荧光。当有特异的而不是非特异的 PCR 发生时，Taq 酶同时发挥其 5'→3'外切酶活性，将与模板杂交的探 针切碎，报告基团与淬灭基团分离，淬灭作用被解除， 荧光信号释放，通过检测系统就可以观察到信号的变 化，荧光信号的累积与 PCR 产物形成呈正相关。上海融享生物科技有限公司主做的qPCR。
在荧光定量 PCR 技术中，有一个很重要的概念—
—Ct 值。C 表示 Cycle（循环），t 表示 threshold(阈值)，
Ct 值的含义是：每个反应管内的荧光信号到达设定的域
值时所经历的循环数，
荧光域值(threshold)的设定：PCR 反应的前 15 个
循环的荧光信号作为荧光本底信号，荧光域值的缺省设
置是 3~15 个循环的荧光信号标准偏差的 10 倍，即：
threshold = 10 ’SDcycle 6-15。
Ct 值与起始模板的关系：研究表明，每个模板的
Ct 值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系，起始
拷贝数越多，Ct 值越小[5-6]。利用已知起始拷贝数的标
准品可做出标准曲线，其中横坐标表示起始拷贝数的对
数，纵坐标表示 Ct 值。因此，只要获得未知样品的 Ct
值，即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数
那么qPCR的优势都有哪些呢？上海SYBRGreen法qPCR哪里有
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实时荧光定量 PCR 技术的分类：荧光探针法：水解探针法。水解探针的结构特点是寡核苷酸序列
的 5′端为荧光报告基团，3′端 为 荧 光 淬 灭 基 团。PCR 扩 增
前，探针游离于靶序列外，报告基团发出的荧光被淬灭基团
吸收，检测不到荧光，但有时会因淬灭不彻底，会检测到微
弱的荧光。在 PCR 退火时，探针特异性地结合到靶序列上，
在延伸阶段，利用 Taq 酶 5′-3′外切酶的活性将探针水解，
荧光报告基团与荧光淬灭基团分离，荧光信号被释放，并与
PCR 产物的数量成正相关。由于水解探针的作用机理依赖
于 Taq 酶 5′-3′外切酶的活性，所以水解探针又称为 Taqman
探针。 上海SYBRGreen法qPCR哪里有